6 斑马鱼急性毒性试验程序

6.1 暴露条件

斑马鱼急性毒性试验程序暴露条件为：

——持续时间：96h；

——光照：每天12h～16h；

——温度：23℃±1℃；

——溶解氧：不小于60％空气饱和值。

6.2 试验鱼数量

设置空白对照组、重铬酸钾毒性参比组及各试验浓度组，每组至少设置2个平行样品，每个样品中加入10尾鱼。

6.3 标准稀释液的配制

用三级水由以下4种溶液制备标准稀释液：

a）氯化钙溶液：将11.76g氯化钙（CaCl₂·2H₂O）溶于水并稀释至1L；

b）硫酸镁溶液：将4.93g硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）溶于水并稀释至1L；

c）碳酸氢钠溶液：将2.59g碳酸氢钠（NaHCO₃）溶于水并稀释至1L；

d）氯化钾溶液：将0.23g氯化钾（KCI）溶于水并稀释至1L。

将上述4种溶液各取25mL，并用三级水稀释至1L。将制备好的稀释水曝气至溶解氧浓度达到空气饱和值，并将pH稳定在7.8±0.2。

6.4 试验步骤

6.4.1 预备试验

预备试验用于确定试验浓度的大致范围。这一范围可以选取较大的浓度间隔，例如1000mg／L、100mg／L、10mg／L、1mg／L和0.1mg／L。

向6个2L烧杯中加入标准稀释液，并按照上述浓度系列加入定量的泡沫灭火剂储备溶液，其中1个烧杯中不加入灭火剂储备溶液作为空白对照。

将溶液在23℃±1℃保持恒温，向每个烧杯中加入5尾鱼开始预备试验，试验时间为24h。每天2次记录烧杯中死鱼数目，并及时将死鱼取出。

6.4.2 正式试验

从24h预备试验中全部鱼死亡的最低浓度和未死鱼的最高浓度之间，以几何级数作为间距，至少选择5个浓度作为正式试验浓度。

取若干个2L烧杯，采用静态试验方法，空白试验组仅加入2L标准稀释液，其他烧杯中分别加入不同量的泡沫灭火剂储备溶液，以得到所要求的浓度值，并用标准稀释液补充至2L。

将试验烧杯温度恒定在23℃±1℃，用尼龙小孔抄网从驯养鱼池中随机选取鱼放入试验烧杯中，每个烧杯中加入10尾鱼。所有的鱼需在30min内转移完毕，转移后清除掉各烧杯液面表层的泡沫。

试验开始后，随时观察并记录试验鱼的平衡、游动、呼吸、体色变化等中毒症状。如果试验鱼没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动，以及用玻璃棒碰触尾部后无反应，即可判断该鱼已死亡。每天记录各容器中的死鱼数目，并及时清出死鱼。记录可见的试验鱼异常情况（如平衡能力丧失，游泳能力和呼吸功能减弱，颜色变浅等）。

每天至少测定一次pH、溶解氧和温度。

6.5 数据处理

绘制试验浓度对斑马鱼的累计死亡率曲线，用Excel、SPSS等常用统计程序对曲线进行拟合。计算死亡率为50％时的泡沫灭火剂浓度值，该浓度即为灭火剂样品对斑马鱼的LC₅₀值，并用标准方法计算95％的置信限，同时计算参比物质重铬酸钾的24hLC₅₀值。

6.6 质量控制

斑马鱼急性毒性试验程序的质量控制要求应同时满足以下3点：

——试验结束时，空白对照组鱼死亡率不超过1尾；

——参比物重铬酸钾的24hLC₅₀值应处于200mg／L～400mg／L之间；

——试验期间，试验溶液的溶解氧浓度不小于60％空气饱和值。

查找上节下节返回
顶部

笔记需登录后才能查看哦~